一、 操作室厭氧環(huán)境形成
1.按使用要求放置好必要的配件和器具，并向操作室內(nèi)放入兩個無毒塑料袋。
2.通電源開照明燈，開控溫儀，調(diào)節(jié)所需溫度及安全溫度。
3.操作室內(nèi)放入鈀粒（封閉）和干燥劑，并放入美蘭指示劑（封閉）。
4.關(guān)緊取樣室內(nèi)外門，并抽真空校驗。
5.操作室內(nèi)第一次置換（氮氣置換）：
（1）先用橡皮管插入操作室內(nèi)進(jìn)氣口，另一頭插入塑料袋。
（2）接通氮氣進(jìn)氣路，打開氮氣控制閥，使兩只塑料袋充足氮氣，然后扎緊袋口。
（3）把乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊。
（4）把塑料袋內(nèi)氮氣漸漸地放于操作室內(nèi)，至全部放出。
6. 操作室第二次置換（氮氣置換）重復(fù)一次充氮過程，并注意隨時用腳踏開關(guān)開閉排氣。
7. 操作室第三次置換（混合氣體置換）
（1）調(diào)換氣路打開混合氣道通閥門進(jìn)氣，充氣時要隨時腳踏開關(guān)開閉排氣。
（2）混合氣充滿塑料袋后，關(guān)掉混合氣直通閥（三通閥），使混合氣經(jīng)過流量計輸入操作并調(diào)整流量計，流量為每分鐘 10 mL左右。
（3）把塑料袋內(nèi)混合氣漸漸排于操作室內(nèi)。
（4）通過三次換氣后，操作室內(nèi)氣體含氧量已處于極微量狀態(tài)。
8.操作室內(nèi)打開鈀粒除氧劑，接通除氧催化器電源進(jìn)行催化除氧，一小時后打開美蘭指示劑觀察其變色情況，不變色為操作室內(nèi)達(dá)到厭氧環(huán)境。
9.開紫外線滅菌燈，室內(nèi)進(jìn)行滅菌處理。滅菌時間自定。
二、菌種的置入和培養(yǎng)
1.檢查取樣室內(nèi)門并關(guān)緊。
2.打開取樣室外門，將菌種放入取樣室后即關(guān)上外門。
3.取樣室充氮置換三次，如選定真空度較低就需要增加置換的次數(shù)。
5.取樣室內(nèi)外門開啟，關(guān)緊要抽低真空度100mm汞柱（13Kpa）檢驗及幫助操作。
（1）每天在操作室內(nèi)打開美蘭指示劑觀察，正常情況下使用。如不正常就必須重新?lián)Q氣。
（2）要長期連續(xù)輸入微量的混合氣體，使補(bǔ)進(jìn)的氫氣能和微量的氧結(jié)合通過催化吸收，保證了室內(nèi)厭氧狀態(tài)，補(bǔ)入混合氣流量選定為每分鐘 10mL左右。
（3）連續(xù)培養(yǎng)運行一天，更換一次除氧劑和干燥劑。
7. 接種棒滅菌器的應(yīng)用
（1）隨時用鎳鉻電熱絲使電極短路而變赤熱以進(jìn)行殺菌（接種棒）。
（2）熔蠟處可直接放上，試管封蠟口旋轉(zhuǎn)熔蠟。
8. 操作室里的培養(yǎng)箱內(nèi)的溫度可任意選擇和控制。
9. 混合氣瓶、氮氣瓶輸出壓力調(diào)整：調(diào)節(jié)減壓閥，使輸出壓力為0.1Mpa左右。
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